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可見分光光度計的使用細節(jié)與操作規(guī)范

更新時間:2025-06-27    點擊次數(shù):219
  可見分光光度計是分析化學和生物實驗中常用的精密儀器,用于測定溶液中物質(zhì)的光吸收特性,從而推導濃度或化學性質(zhì)。其核心原理基于朗伯-比爾定律(A = εlc),即吸光度與溶液濃度、光程長度及摩爾吸光系數(shù)成正比。為確保測量準確性和儀器穩(wěn)定性,需嚴格遵循以下操作細節(jié):
  一、前期準備與儀器檢查
  1. 環(huán)境要求
  - 儀器需放置在平穩(wěn)臺面,避免震動和強光直射。
  - 室溫應保持恒定(20-25℃),濕度控制在40%-60%,防止光學元件受潮或結(jié)露。
  - 電源電壓需穩(wěn)定,建議配備穩(wěn)壓電源或UPS,避免電壓波動影響檢測器靈敏度。
  2. 儀器自檢
  - 開機前檢查樣品室是否清潔,無殘留液體或灰塵。
  - 確認氘燈(或鎢燈)壽命,若光源強度不足(如透光率偏差>10%),需及時更換。
  - 檢查波長校準:用汞燈或鈥玻璃濾光片校正波長準確性(允許誤差±1 nm)。
  二、操作流程與關鍵步驟
  1. 開機預熱與初始化
  - 開啟電源后預熱15-30分鐘,使光源、單色器及檢測器達到熱平衡。
  - 初始化儀器:選擇可見光波段(380-780 nm),設置掃描模式或固定波長模式。
  2. 參比溶液的制備與校準
  - 參比液選擇:通常為溶劑(如蒸餾水、緩沖液),需與待測樣品基質(zhì)一致。
  - 校準操作:
  - 將參比液倒入1 cm比色皿,用擦鏡紙擦拭外壁至透明。
  - 放入樣品室,關閉蓋板,調(diào)零透光率(T%=100%)或吸光度(A=0)。
  - 若測量波長超出參比液適用范圍(如色素干擾),需采用空氣校準或二次參比法。
  3. 樣品測量與數(shù)據(jù)記錄
  - 比色皿使用規(guī)范:
  - 選擇匹配的石英或玻璃比色皿(光學面潔凈,無劃痕)。
  - 倒入樣品時沿壁緩慢添加,避免產(chǎn)生氣泡;若有氣泡,用軟紙巾輕拭排出。
  - 測量高濃度樣品時,可稀釋后測試,防止吸光度超出線性范圍(A=0.2-1.0為佳)。
  - 數(shù)據(jù)讀取:
  - 固定波長下直接讀取吸光度(A)或透光率(T%),連續(xù)測量3次取平均值。
  - 若需全波長掃描,設置適當狹縫寬度(通常1-2 nm),觀察特征吸收峰位置。
  4. 數(shù)據(jù)處理與分析
  - 標準曲線法:配制系列濃度標準品,繪制A-C標準曲線,計算樣品濃度。
  - 差值法:用于復雜樣品,通過參比液與樣品的吸光度差值定量。
  - 記錄內(nèi)容:波長、吸光度、參比液信息、測量時間及環(huán)境條件。
  三、注意事項與常見問題
  1. 避免污染與誤差
  - 勿用手觸摸比色皿光學面,指紋可用鏡頭紙蘸乙醇擦拭。
  - 測量揮發(fā)性樣品時,動作迅速并加蓋比色皿,防止溶劑蒸發(fā)導致濃度變化。
  - 同一組實驗中,參比液與樣品液的測量順序需交替進行,減少系統(tǒng)誤差。
  2. 光源維護
  - 氘燈或鎢燈連續(xù)使用不超過4小時,避免過熱損壞。
  - 關閉樣品室蓋后再調(diào)整參數(shù),防止外界光線干擾。
  3. 故障排查
  - 噪聲大:檢查電源穩(wěn)定性,清潔檢測器窗口。
  - 基線漂移:重新校準參比液,確認波長準確性。
  - 吸光度異常:檢查比色皿是否匹配,樣品是否有沉淀或渾濁。
  四、儀器維護與保養(yǎng)
  1. 日常維護
  - 測量結(jié)束后用蒸餾水沖洗比色皿,晾干后存放。
  - 清潔樣品室,用防塵罩覆蓋儀器,定期更換干燥劑。
  - 每月檢查波長精度,必要時聯(lián)系廠家校準。
  2. 長期停用
  - 切斷電源,取出比色皿,在樣品室放置干燥劑。
  - 記錄儀器使用日志,包括運行時間、維修記錄及耗材更換情況。

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